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胃蛋白酶(pepsin)活性检测试剂盒 BES234806S

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注 意:

正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。 

测定意义: 

胃蛋白酶由胃粘膜主细胞分泌,分解食物中蛋白质成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别,慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。 

测定原理: 

胃蛋白酶可催化血红蛋白水解,水解产物与福林试剂反应后显蓝色;一定范围内,其颜色的深浅与胃蛋白酶活性呈正比。 

自备仪器和用品:

 可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。 

试剂组成和配制: 

试剂一:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。 

试剂二:液体 20mL×1 瓶,4℃保存。 

试剂三:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前加入 10mL 试剂二充分溶解。 

试剂四:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 10mL 蒸馏水充分溶解。 

试剂五:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 15mL 蒸馏水充分溶解。 

试剂六:液体 3.3mL×1 瓶,4℃保存。标准品:液体 1.27mL×1 支,0.5μmol/mL 酪氨酸标准溶液浓度 4℃保存。 

粗酶液提取:组织样品:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)冰浴匀浆,8000g,4℃离心 10min,取上清,即粗酶液。 

测定步骤: 

  1. 分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长到 580 nm,蒸馏水调零。

  2. 试剂三和试剂四置于 37℃水浴预热 30min。

  3. 标准管:取微量玻璃比色皿/96 孔板,加入 20μL 标准品,40μL 试剂二,120μL 试剂五,20μL 试剂六,混匀后室温静置 20min,于 580 nm 测光吸收,记为 A 标准管。

  4. 空白管:取微量玻璃比色皿/96 孔板,加入 20μL 蒸馏水,40μL 试剂二,120μL 试剂五,20μL 试剂六,混匀后室温静置 20min,于 580 nm 测光吸收,记为 A 标准空白管。

  5. 对照管:取 EP 管,加入 100 μL 蒸馏水,置于 37℃水浴保温 10min;加入 100μL 试剂四,盖紧后摇匀 1min;加入 20μL 粗酶液,混匀后 8000g 4℃离心 10 分钟取上清;在微量玻璃比色皿/96 孔板加入上清液 20μL,再加入 40μL 试剂二,120μL 试剂五,20μL 试剂六,混匀后室温静置 20min,于 580 nm 测光吸收,记为 A 空白管。

  6. 测定管:取 EP 管,加入 20μL 粗酶液,100μL 试剂三,置于 37℃水浴保温 10min;加入 100μL 试剂四,

盖紧后摇匀 1min;8000g 4℃离心 10 分钟取上清;在微量玻璃比色皿/96 孔板加入上清液 20μL,再加入40μL 试剂二,120μL 试剂五,20μL 试剂六,混匀后室温静置 20min,于 580 nm 测光吸收,记为 A 测定管。注意:空白管和标准管只需要测定一次。

注意事项:试剂三、试剂四、试剂五临用前配制,配制好用不完的试剂 4℃可保存一周。


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