NO含量测试盒

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。 

测定意义

NO（Nitric Oxide，NO）广泛分布于生物体内神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统中，特别是神经组织中较丰富。它作为细胞间及细胞内的信息物质，发挥信号传递的作用，是一种新型的生物信使分子，在机体的生理、病理过程中起着重要的作用。

 测定原理

NO 在体内或水溶液中极易氧化生成 NO2—，在酸性条件下，NO2—与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物，进一步与萘基乙烯基二胺偶合，产物在 550nm 处有特征吸收峰，测定其吸光值，可以计算 NO 含量。 

自备实验用品及仪器

天平、研钵或匀浆器、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水。 试剂组成和配制

提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 15mL×1 瓶，4℃避光保存。（用之前震荡溶解后使用）

试剂二：液体 15mL×1 瓶，4℃避光保存。（用之前 60℃加热震荡 15min）

样品处理

1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆。10000g，4℃离心 15min，取上清，置冰上待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 15min，取上清置于冰上待测。

3. 体液和培养液等其它液态样品：直接测定。

 测定步骤和操作表

NO 含量计算

标准曲线回归方程为：y= 0.016x -0.0103，R2= 0. 9986

1、组织样品：

（1）按样本质量计算

NO 含量（μmoL/g 鲜重）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）×10-3= 0.14×（ΔA +0.0103）÷W

（2）按样本蛋白浓度计算

NO 含量（μmoL/mg prot）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反总÷（V 样×Cpr）×10-3 = 0.14×（ΔA +0.0103）÷Cpr

2、细胞：

NO 含量（μmol/104 cell）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反总÷（V 样÷V 样总×细胞数量）×10-3 = 0.14×（ΔA +0.0103）÷细胞数量（万个）3、其他样品：

NO 含量（μmoL/L）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反总÷V 样= 140×（ΔA +0.0103）V 反总：反应总体积，0.9mL；V 样：反应中样品体积，0.4mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g；Cpr：蛋白浓度，mg/mL