细胞自噬检测试剂盒（绿色荧光）

产品简介：

自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，最终将吞食物在溶酶体内降解的过程，自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物，损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌等。自噬是溶酶体介导的胞内降解途径，是真核细胞在恶劣环境（比如营养缺乏）威胁时引发的降解和细胞内容物再循环的过程。这一途径在对各种应激条件进行应答从而在促进细胞内环境平衡、能量平衡和细胞存活上具有重要的作用，更多的证据表明自噬功能与多种疾病密切相关，包括癌症、神经退行性疾病、糖尿病、自身免疫性疾病和心血管疾病。

 细胞自噬检测试剂盒是采用 MDC 染色法染色细胞内自噬体的检测试剂盒，该产品可代替传统 LC3-GFP 法，通过荧光示踪物来选择性检测自噬通路中的各种囊泡包括自噬前体、自噬体和自溶酶体，用于流式细胞仪，无需转染，就能在荧光显微镜下跟踪活细胞的自噬过程进行定量分析，或用流式细胞仪进行高通量筛选，甚至能标记原代细胞。并且该产品可以进行自噬通路的动力学分析，为研究者展现自噬体形成和消除之间的动态平衡。 

 细胞自噬检测试剂盒中的 MDC 自噬体染色探针为绿色荧光标记的自噬体探针，具有 335nm / 518nm 的最大激发/发射波长。

 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内 pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。

 可以为您提供各种颜色的 M 系列、N 系列、L 系列、E系列、G 系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。

 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。

产品应用：

激光共聚焦/荧光显微镜/流式细胞仪

产品特点：

1.无需转染，可在活细胞内定量检测细胞自噬情况，可在活细胞内定量检测自噬小泡和监控活细胞自噬流（自噬体的合成、自噬底物到溶酶体的运输、自噬底物在溶酶体的降解过程）；

2.适用于流式细胞检测和显微镜分析；

3.可用于高通量筛选自噬的激活剂和抑制剂；

4.可选择性地对前自噬体、自噬体和自噬性溶酶体进行染色，而对溶酶体染色较少。

使用方法：

1.MDC 染色液为 DMSO 溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

2.使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使 DMSO 溶液集中于管底。

3.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

4.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。

5.染色后立即进行分析。

6.本试剂采用紫外激发，不能用蓝光激发。

1. 染色工作液配制：

根据样本数量，用检测缓冲液将 MDC 荧光染料 10 倍稀释，再用相应的培养基或者 HBSS 缓冲液 40-200 倍稀释，配制成染色工作液。

2. 细胞染色

2.1 对于贴壁细胞

1）将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。

2）待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量 37℃预热的含 MDC 探针工作液。于生长状态下孵育 15分钟-1 小时（具体孵育时间需根据细胞类型而定）。

3）利用新鲜培养基或 PBS 替换上述染色液并在荧光显微镜（含合适滤片）下观察。

2.2 对于悬浮细胞

1）离心，吸除上清。

2）利用 37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下孵育 15 分钟～1 小时（具体时间需根据细胞类型而定）。

3）离心，吸除染色液，加入新鲜培养液或 PBS 重悬细胞。

4）置于荧光镜下观察或流式检测。

3. 观察结果：

在荧光显微镜（含合适滤片）/酶标仪/流式细胞仪下观察细胞。

最大激发/发射波长为 335/518 nm。

常见问题分析：

1.为什么 488nm 激发没有绿色荧光？

不同于大多数常见的 488nm 激发的绿色荧光染料，本自噬体绿色荧光探针应采用紫外光激发。

不能采用 FITC 的检测条件激发本自噬荧光探针。

注意事项：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。