琥珀酸脱氢酶(SDH)检测试剂盒

产品简介：

琥珀酸脱氢酶（SDH）检测试剂盒是利用 SDH 催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS）传递还原 2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），并且在 600nm处具有特征吸收峰，通过 600nm 吸光度的变化，测定 2．6-DPIP 的还原速度，代表 SDH酶活性。

 琥珀酸脱氢酶 SDH（EC 1.3.5.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。SDH 是线粒体的一种标志酶，位于线粒体内膜上的一种膜结合酶，是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一，可为真核细胞线粒体和多种原核细胞需氧和产能的呼吸链提供电子。为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。

 琥珀酸脱氢酶作为参与三羧酸循环的关键酶，琥珀酸脱氢酶是反映线粒体功能的标志酶之一，其活性一般可作为评价三羧酸循环运行程度的指标。

 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内 pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。

 可以为您提供各种颜色的 M 系列、N 系列、L 系列、E系列、G 系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色

试剂盒产品。

 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。

产品应用：

微孔板，酶标仪

使用方法：

1.如果样品浓度过高，可以用蒸馏水稀释后再检测，结果乘以稀释倍数即可。

一、 试剂配制：

1. 用 13mL 纯水充分溶解试剂 B2，加入 5ml 试剂试剂 B1，充分混匀。配制成试剂 B 工作液。置于 37℃水浴10min；用不完的试剂分装后-20℃保存，避免反复冻融；

2. 在试剂 C 中加入 1mL 纯水，充分溶解，配制成试剂 C 工作液。用不完的试剂分装后-20℃保存，避免反复冻融。

二、 样本处理：

1. 取 50-100mg 组织样本，用 PBS 洗干净，然后用手术剪刀尽可能剪碎，加入 200ul SDH 提取液，用组织匀浆器/匀浆机匀浆至无明显肉眼可见固体。

【注】：

细胞样本取 5×106 -1×107 个细胞，直接加入 200ul SDH 提取液，用组织匀浆器/匀浆机匀浆。

2. 将匀浆液吸入一预冷的干净离心管中，在 4℃条件下振荡 10-20 分钟。

【注】：

使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。

没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。

3. 在 4℃，8000×g 条件下离心 5 分钟。

4. 取上清待测。

三、 SDH 测定

1. 酶标仪预热，调节波长至 600nm，纯水调零。

2. 在 96 孔板中加入 10μL 样本、180μL 试剂 B 和 10μL 试剂 C，混匀，立即记录 600nm 处 20 秒时的吸光值A1 和 80 秒 后的吸光值 A2，计算 ΔA=A1-A2。

四、 计算

1. 按样本蛋白浓度计算

单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。

SDH 活性（nmol/min/mg prot）

＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T

=1904×ΔA÷Cpr

2. 按样本鲜重计算

单位的定义：每 g 组织每分钟消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位

SDH 活性（nmol/min/g 鲜重）

＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(W× V 样÷V 样总)÷T

=384×ΔA÷W

3. 按细胞密度计算

单位的定义：每 1 万个细胞每分钟消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。

SDH 活性（nmol/min/104cell）

＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T

=0.77×ΔA

式中：

V 反总：反应体系总体积，2×10-4L；

ε：2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数，2.1×104L / mol /cm；

d：光径，0.5cm；

V 样：加入样本体积，0.01 mL；

V 样总：加入提取液体积，0.2mL；

T：反应时间，1 min；

Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；

W：样本质量，g；

500：细胞总数，500 万。

注意事项：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。