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β-N-乙酰葡萄糖苷酶(NAG)检测试剂盒
产品简介：
β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（简称 NAG）广泛存在于各种组织器官、体液、红细胞、白细胞及血小板中，是溶酶体中的一种酸性水解酶。此酶为溶酶体中一种重要的酶，可作为肾损伤一个极为灵敏的指标，由休克引起急生肾功能衰竭的机体尿液中极度增高，最高可达正常情况下的 1200 倍。急性肾小球肾炎、肾病综合症，毒物或药物引起的肾毒性反应均可使 NAG增加。肾移植后，NAG 的测定可用来判断有无排斥反应。
β-N-乙酰葡萄糖苷酶检测试剂盒（PNP 比色法）（NAG ColorimetricAssay Kit）检测原理是在酸性条件下 NAG 可使底物对硝基酚-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷水解，释放出游离的对硝基酚(p-nitrophenol，PNP)，在碱性条件下 p-nitrophenol 呈黄色产物，产物黄色越深，说明 β-N-乙酰葡萄糖苷酶活性越高，反之则酶活性越低，通过分光光度比色法测定 400～410nm 处吸光值，据此通过比色分析就可以计算出酶活性水平。
本试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中的 β-N-乙酰葡萄糖苷酶活性。
可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内 pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。
可以为您提供各种颜色的 M 系列、N 系列、L 系列、E系列、G 系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。
产品应用：
微孔板，酶标仪
使用方法：
1.试剂 D 天冷时会有结晶析出，使用前置于 37℃水浴至透亮。
一、血清的 NAG 活力测定
0.6mmol/L 对硝基酚标准工作液的配制：
将 3mmol/L 对硝基酚标准储备液 E 进行 5 倍稀释，即 3mmol/L 标准储备液：纯水=1:4.
底物缓冲液的配制：
底物溶解度小，配制底物溶液时，应先用适量试剂 A 将试剂 B 粉剂 1 支调成糊状，再边搅拌边逐渐加试剂 A到 30ml，混匀至完全溶解（不可加热）。
【注】：
配好后的底物缓冲液为过饱和溶液，如有结晶，可静置或离心后取上清进行检测。
用不完的底物缓冲液 4℃可保存 2 个月。
操作步骤：
在 1.5ml 离心管中按下表添加试剂进行反应：
【注】：
37℃反应时可以水浴也可以置培养箱。
充分混匀，2000g 离心一分钟，吸取 200ul 上清液体加入 96 孔板。
用纯水调零，波长 400nm 处测定各孔的吸光度值。
计算：
1. 酶活力单位定义：
每升样品与底物在 37℃作用 1 分钟，水解产生 1umol 对硝基酚为 1 个酶活力单位。
2. 计算公式：
NAG 活力 = 测定孔 OD 值-对照孔 OD 值 x 标准品浓度 x 1 x 1000
（U/L） 标准孔 OD 值-空白孔 OD 值 （0.6mmol/L） 反应时间 15min
3. 计算举例：
取血清 50ul 按操作表进行检测，测得各孔吸光度如下：空白孔为 0.003，标准孔为 0.436，对照孔为 0.148，
测定孔为 0.432，则计算结果如下：
NAG 活力 = 测定孔 OD 值-对照孔 OD 值 x 标准品浓度 x 1 x 1000
（U/L） 标准孔 OD 值-空白孔 OD 值 （0.6mmol/L） 反应时间 15min
= 0.432-0.148 x 0.6 x 1 x 1000 =26.236 U/L
0.436-0.003 15
二、组织样本的 NAG 活力测定
组织样本的前处理：
准确称取样本的重量，按照重量（g）：体积（ml）=1:9 的比例，加入 9 倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，制成 10%匀浆，2500g，离心 10 分钟，取上清再用生理盐水稀释成 1%的匀浆液待测。
操作步骤：
在 1.5ml 离心管中按下表添加试剂进行反应：
【注】：
37℃反应时可以水浴也可以置培养箱。
充分混匀，2000g 离心一分钟，吸取 200ul 上清液体加入 96 孔板。
用纯水调零，波长 400nm 处测定各孔的吸光度值。
计算：
1. 酶活力单位定义：
每克组织蛋白与底物在 37℃作用 1 分钟，水解产生 1umol 对硝基酚为 1 个酶活力单位。
2. 计算公式：
组织 NAG 活力= 测定孔 OD 值-对照孔 OD 值 x 标准品浓度 x 1000 ÷ 1%匀浆蛋白含量
（U/gprot） 标准孔 OD 值-空白孔 OD 值 （3mmol/L） 反应时间 15min （gprot/L）
注意事项：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。