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总抗氧化能力(ABTS法)测试盒 BES-BK2706B

总抗氧化能力(ABTS法)测试盒

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 总抗氧化能力(ABTS法)测试盒

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

研究意义:

测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液,细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。

测定原理:

ABTS 法是使用最广泛的间接检测方法,可用于亲水性和亲脂性物质抗氧化能力测定。ABTS经氧化后生成稳定的蓝绿色阳离子自由基 ABTS+,能溶于水相或酸性乙醇介质中,在 734nm处有最大吸收。被测物质加入 ABTS+溶液后,所含抗氧化成分能与 ABTS+发生反应而使反应体系褪色。在 734nm 检测吸光度的变化,并以 Trolox 作为对照体系量化抗氧化物质的抗氧化能力。

自备实验用品:

恒温水浴锅、低温离心机、分光光度计、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 60mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:粉剂×2 瓶,4℃避光保存。

样品的制备:

(1) 血清、血浆、唾液或尿液等液体样品

血浆(制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝,不宜使用 EDTA 抗凝)4℃,5000rpm 离心10min,取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定,也可以-80℃冻存(不宜超过30 d)后再测定。

(2) 组织样品

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

(3) 细胞样品

按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入1mL 提取液),冰浴超声波破碎(功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);10000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

操作步骤:

1、 分光光度计预热 30min,调节波长至 734nm。

2、 工作液的配置:临用前取试剂二一瓶,加入 25mL 试剂一,震荡混匀 20min 后,静置,

取上清使用。(注意,现配现用)

3、操作表(在 EP 管中反应)

2021091911563306691

注意:空白管只需测定一次,吸取工作液时不要吸到底部沉淀,若 A 测定小于 0.4,需用提取液稀释后检测。

总抗氧化能力计算公式:

1、以自由基清除率表示:

ABTS 自由基清除率(%)=(A 空白-A 测定)÷A 空白×100%

2、以标准曲线上获得的抗氧化剂 Trolox 的量表示:

标准曲线:y = 1.4042x - 0.0012 R2 = 0.9985 x:Trolox 浓度(μmol/mL) y:吸光值差值△A

单位定义:用从标准曲线上获得的抗氧化剂Trolox的量来表示样本的ABTS自由基清除能力。

(1)按样本质量计算

总抗氧化能力(μmol Trolox/g 鲜重)=(△A+0.0012)÷1.4042×V 样÷(V 样÷V 样总×W) =0.712×(△A+0.0012)÷W

(2)按样本蛋白浓度计算

总抗氧化能力(μmol Trolox/mg prot)=(△A+0.0012)÷1.4042×V 样÷(V 样÷V 样总×Cpr) =0.712×(△A+0.0012)÷Cpr

(3) 按细胞计算

总抗氧化能力(μmol Trolox/104cell)=(△A+0.0012)÷1.4042×V 样÷(V 样÷V 样总×细胞数量(万个))= 0.712×(△A+0.0012)÷ 细胞数量(万个)

(3)按液体体积计算

总抗氧化能力(μmol Trolox/mL)=(△A+0.0012)÷1.4042=0.712×(△A+0.0012)V 样总:加入提取液体积,1 mL;V 样:反应中样品体积,50μL;W:样品质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL

注意事项:

1. 尽量避免使用在中碱性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂,否则对本试剂盒的检测结果产生干扰。

2. 样品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂。


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