尿素氮测试盒

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

尿素是生物体内含氮化合物分解的终产物，在尿酶催化下分解转化成氨。血液尿素氮是肾功能的主要指标之一。 

测定原理

样本中尿素氮在氯化高铁一磷酸溶液中与二乙酰一肟和硫胺脲共煮，生成一种红色的二嗪化合物，其颜色的深浅与尿素氮含量成正比，采用二乙酰一肟法测定尿素氮含量。 

自备实验用品及仪器

天平、研钵、常温离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅。 

试剂组成和配制

试剂一：液体 6mL×1 瓶，4℃避光保存，

试剂二：液体 60mL×1 瓶，4℃避光保存。 样品处理

1. 组织：按照质量（g）：蒸馏水体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL蒸馏水）加入蒸馏水，匀浆后于 25℃，10000g 离心 10min，取上清待测。

2. 细胞：按照细胞数量（104个）：蒸馏水体积（mL ）为 500~1000：1 的比例（建议 500万细胞加入 1mL 蒸馏水），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 4℃，10000g 离心 10min，取上清置于冰上待测。

3. 血清或其它液体：直接检测。 

测定操作

混匀，沸水浴 10min，冷却后，540nm 下测定吸光值。△A=A 测定-A 空白。空白管只要做一管。 

尿素氮含量计算：

标准条件下测定回归方程为 y =2.048x + 0.0229，R2 = 0.9943；x 为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。

1、按照血清（浆）或者细胞培养液体积计算

尿素氮含量(mg/mL)= (△A-0.0229)÷2.048=0.4882×(△A-0.0229)

2、按照样本质量计算

尿素氮含量 mg/g 鲜重)= (△A-0.0229)÷2.048×V 样总÷W=0.4882×(△A-0.0229)÷W

3、按照蛋白浓度计算

尿素氮含量(mg/mg prot)= (△A-0.0229)÷2.048÷Cpr=0.4882×(△A-0.0229) ÷Cpr

V 样总：加入提取液体积，1 mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。