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碘化丙啶PI染色液(1mgml) BES2212CS

碘化丙啶染色(PI stain)可以对细胞周期与细胞凋亡进行分析。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种可以嵌合到双链DNA和RNA的碱基对中并与之结合的荧光染料,无碱基特异性。

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碘化丙啶PI染色液(1mgml)  

产品简介:

碘化丙啶染色(PI stain)可以对细胞周期与细胞凋亡进行分析。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种可以嵌合到双链 DNA 和 RNA 的碱基对中并与之结合的荧光染料,无碱基特异性。碘化丙啶与双链 DNA 结合后可以产生荧光,并且荧光强度和双链 DNA 的含量成正比。细胞内的 DNA 被 Propidium Iodide 染色后,可以用流式细胞仪对细胞进行 DNA 含量测定,然后根据 DNA 含量的分布情况,可以进行细胞周期和细胞凋亡的分析。碘化丙啶染色后,假设G0/G1 期细胞的荧光强度为 1,那么含有双份基因组 DNA 的 G2/M 期细胞的荧光强度的理论值为 2,正在进行 DNA 复制的 S 期细胞的荧光强度为 1~2 之间。

凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生 DNA 片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组DNA 片断在染色过程中丢失,因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染,即荧光强度小于 1,在流式检测的荧光图上出现所谓的 sub-G1 峰,即凋亡细胞峰。

细胞凋亡时,流式细胞检测可呈现亚二倍体核型的特征,根据光散射的特点,PI 染色可以区分细胞凋亡和细胞坏死的细胞峰型。细胞凋亡时,出现凋亡细胞皱缩、染色质浓缩、核碎裂,产生凋亡小体,使细胞的前向光散射低于正常。在细胞凋亡的早期,细胞对前向角光散射的能力显著降低,对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期,前向和侧向光散射的信号均降低。细胞坏死时细胞多表现为细胞肿胀,因此前向光散射高于正常,对侧向光散射高于正常。

碘化丙啶 PI 染色液(1mg/ml)主要由 PI、破膜剂等组成,经常用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测, 亦可用于区分细胞凋亡和细胞坏死。 PI 染色液工作浓度为 20~50μg/ml,不含 RNase,推荐用于 RNA 染色,细胞检测含量范围一般为 0.1~1×106 之间。

操作步骤(仅供参考):

1、细胞样品的制备:

⑴贴壁细胞:

小心收集细胞培养液到一个无菌离心管内备用。用胰蛋白酶消化细胞至可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时,加入前面收集的细胞培养液,吹打下所有的贴壁细胞,并轻轻吹散细胞。

收集上述细胞悬液到离心管内。

4℃,1000g 离心 3~5min,使细胞沉到管底。小心吸取上清并丢弃,可留大约 50μl 培养液,以免吸走细胞。

加入约 1ml 提前预冷的 PBS,重悬细胞,并转移至 1.5ml 无菌离心管。

4℃,1000g 离心 3~5min,使细胞沉到管底。

小心吸取上清并丢弃,可留大约 50μl PBS,以免吸走细胞。

轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。

⑵悬浮细胞:

4℃,1000g 离心 3~5min,使细胞沉到管底。

小心吸取上清并丢弃,可留大约 50μl 培养液,以免吸走细胞。

加入约 1ml 提前预冷的 PBS,重悬细胞,并转移至 1.5ml 无菌离心管。

4℃,1000g 离心 3~5min,使细胞沉到管底。

小心吸取上清并丢弃,可留大约 50μl PBS,以免吸走细胞。

轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。

2、细胞的固定:加入 1ml 冰浴预冷 70%乙醇中,轻轻吹打混匀,4℃条件下固定 2h 或更长

时间。4℃固定 12~24h 可能效果更佳。

3、细胞的清洗:

4℃,1000g 离心 3~5min,使细胞沉到管底。

小心吸取上清并丢弃,可留大约 50μl 溶液,以免吸走细胞。

加入约 1ml 提前预冷的 PBS,重悬细胞,并转移至 1.5ml 无菌离心管。

4℃,1000g 离心 3~5min,使细胞沉到管底。

小心吸取上清并丢弃,可留大约 50μl PBS,以免吸走细胞。

轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。

PI 染色:在每个待检细胞样品中加入 500μl 配制好的 PI 染色工作液,轻轻重悬细胞沉淀,置于 37℃避光水浴 30min。在 24h 内进行染色或流式细胞仪分析。

5、检测与分析:用流式细胞仪在激发波长 488nm 波长处检测红色荧光,同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞 DNA 或 RNA 含量分析和光散射分析。

染色结果:凋亡细胞 G1 峰左侧出现亚二倍体细胞群的峰型,在光散射谱上,前向光散射低于正常,侧向光散射高于正常。

注意事项:

荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽快检测。

为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。

在为了获得细胞沉淀的离心的过程中,对于特殊细胞,如果细胞沉淀不充分,可以适当提高离心力或延长离心时间。

如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测,则必须把组织消化后,制备成单细胞悬液,才可以进行检测。

细胞凋亡时,凋亡细胞的标志之一是 DNA 可染行降低,但这种情况并不是完全的,DNA 含量的降低或者 DNA 与染料结合能力下降也会导致 DNA 可染行降低,在分析的时候应特别注意。

PI 对人体有刺激性,请注意适当防护。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

产品货号:BES2212CS

产品规格1ml/10x1ml

有效期:12个月有效。

注意事项:该产品仅供科研实验使用,未经允许不得用于其它用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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