Ca2+钙离子检测试剂盒-F16法，红色荧光

产品简介：

钙离子检测试剂盒采用 F16 细胞内钙离子浓度荧光探针检测钙离子浓度水平的变化。

 F16 是一种可见光激发的钙离子荧光探针，可以通过其结合钙离子后的荧光强度变化情况反应钙离子浓度。 F16 荧光探针采用可见光激发，与传统的紫外光激发的荧光探针相比，仪器的适用范围更广泛，降低了对活细胞的光毒性，检测敏感度更高。F16 也可以与其它的单激发的，绿色荧光钙指示剂一起联合使用，进行单细胞中的钙离子浓度定量比率测量。

钙离子浓度变化是活细胞接受外界刺激后产生级联反应的重要信息传递方式，因此细胞内钙离子检测是信号转导 G 蛋白偶联受体（GPCR）介导的相关药物筛选以及其他相关实验中非常重要的一种研究手段。

F16 的激发波长为 450-500 nm，超长的发射波长的最大值为 660 nm，可以最大限度地减少组织和生物体液中自发荧光和色素沉着的干扰。F16 的巨大 Stokes 位移使得F16 荧光可以与荧光素或荧光素样染料结合使用进行仅一个激发波长的多色分析。例如，研究人员已经能够同时测量单核细胞和粒细胞中的 Ca2 +通量和氧化应激，同时测量 F16 和二氢罗丹明 123 检测活性氧。F16 还可以与转染细胞中的蓝色荧光蛋白结合使用进行多色标记。

 F16 指示剂的荧光比其他可见光可激发的 Ca2+指示剂的荧光弱，因此需要在细胞中使用更高浓度的指示剂来产生等效荧光。

 本试剂盒采用 F16，AM 标记细胞内钙离子，F16，AM 具有极高的细胞渗透性，经过简单孵育即可实现细胞加载。穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成不易透过细胞膜的 F16 新产物，从而被滞留在细胞内。当它与细胞内钙离子结合后荧光强度减弱，使用激发波长为 450-500 nm，最大发射波长为 660 nm。实际检测时推荐使用的激发波长为 488 nm 左右。可以使用荧光显微镜、酶标仪、激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化。以 96 孔板每个孔 100 μl 染色液计，本试剂盒小包装大约可以染色 50-100 个样。

 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内 pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。

可以为您提供各种颜色的 M 系列、N 系列、L 系列、E系列、G 系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。

 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。

产品应用：

流式细胞仪/荧光显微镜/激光共聚焦

使用方法：

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

2.钙离子染色液为 DMSO 溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

3.探针为了便于观察防止误操作导致损失，在试剂盒中时是采用透明管包装，收到后可以离心移入干燥黑色避光密封管或者用铝箔包裹避光。

4.荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

5.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

6.染色后立即进行分析。

7.F16，AM 探针容易受潮，稳定性较差，注意干燥保存。从冰箱取出后，请确认在干燥的环境放至室温后再开封。

8.F16，AM 探针母液时要用干燥的新吸头，不能使用含水的吸头。

9.未使用完的 F16，AM 探针母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。母液遇水极易分解，如果长期不用，建议根据每次使用量分装保存，用封口膜封口，并用铝箔纸包裹，放在一个密闭性能好的塑料袋中，并放入一包干燥剂，在≤-20℃密封避光保存。

10.F16，AM 探针工作液含水，配制后不可以长期保存，须现配现用。

11.F16，AM 融解后离心至管底部再打开螺旋盖，防止开盖时损失。

12.可以在染色工作溶液中加入 20% Pluronic F127 溶液（可选步骤），Pluronic F127 可以帮助F16，AM 更快进入细胞，不建议在 Pluronic F127 中长期保存  F16，AM 溶液。

13.如果您的细胞（如 CHO 细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可以将丙磺舒（最终浓度为 1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM）添加到染料工作溶液中，以减少脱酯化探针的泄漏。

14.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先确定最佳条件。在正式实验前先摸索一下细胞量、钙离子荧光探针的终浓度、培养时间等，找到最佳实验条件。以下方法仅供参考。

1. 染色工作液的配制：

用 HBSS 稀释 F16，AM 溶液 200 倍-500 倍，配制成 F16，AM 染色工作液。

2. 收集培养好的待测细胞样本，用 HBSS 洗涤细胞 3 次。

3. 离心去上清后，将 F16，AM 染色工作液加入细胞，在 37℃孵育 20 -120 分钟。

4. 用 HBSS 洗涤细胞 1-2 次。

5. 加 HBSS 缓冲液至细胞。

6. 然后用该细胞进行荧光钙离子检测。

激发波长 488 nm，发射波长 600-660 nm。

常见问题分析：

1.流式检测时细胞出现分群？

荧光钙离子检测灵敏度极高，用流式细胞仪检测时可能会碰到细胞分群的现象，出现两个峰，是样本中出现钙离子浓度有差异的细胞群体。

此时分析时需要圈选所有细胞群，分析所有细胞的平均荧光强度。

有条件可以使用酶标仪或分光光度计检测。

注意事项：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。