细菌活性检测试剂盒-CCK8

产品简介：

细菌活性检测试剂盒 (CCK-8 法) 是应用新型的水溶性四唑盐 2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐快速高灵敏度检测细菌活性的比色检测产品。

 本四唑盐在电子载体存在的情况下能够被细菌的脱氢酶还原成橙黄色的水溶性的Formazan，生成的 Formazan 量与细菌的活性成正比。细菌活性越强，则颜色越深；细菌活性越弱，则颜色越浅。对于同样的细菌，颜色的深浅和细菌活性呈线性关系。

 CCK-8 溶液可以直接加入到细菌样品中，不需要预配各种成分，CCK-8 溶液很稳定，对细菌没有毒性，可以长时间培养细菌。

 本试剂盒可以用于各种革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的活性检测。包括常见的大肠杆菌、绿脓杆菌、肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、沙门氏菌、副溶血性弧菌、肺炎克雷伯菌、小肠结肠炎耶尔森菌、变形杆菌、粘质沙雷氏菌、醋杆菌属等；金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、李斯特菌、表皮葡萄球菌、干酪乳杆菌、谷氨酸棒杆菌、蜡状芽孢杆菌、粪肠球菌、藤黄微球菌等。

 可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内 pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。

产品应用：

酶标仪

产品特点：

1.使用方便：仅使用单一试剂；

2.灵敏度高，数据可靠，重现性好，线性范围更宽；

3.结果稳定：试剂本身稳定性高，实验结果稳定可靠；

4.无需放射性同位素和有机溶剂，对微生物毒性低；

5.适合于高通量药物筛选。

使用方法：

1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2.需长时间保存可-20℃避光保存。避免反复冻融，否则将会增加空白吸收，从而影响检测结果。最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光。

3.正式实验前，建议先做几个孔摸索接种细菌的数量和加入 CCK- 8 试剂后的培养时间。培养时间一般在 1-4小时。

4.部分药物可能对检测有影响，有影响时需去除药物后再检测，无影响时直接检测。用培养基或 PBS 来配制待检测药物，加入 CCK-8 试剂，测药物溶液在 450 nm 处的吸光度。如果该吸光度与不含药物仅加 CCK-8 试剂的培养基或 PBS 吸光度差异不大，则可以直接加入 CCK-8，如果吸光度相对较大，则需要除去培养基，并用新鲜培养基洗涤菌体两次，然后加入新的 100μl 培养基和 10μl CCK-8 进行检测。

5.接种时注意菌液一定要混匀，以避免菌体沉淀下来，导致每孔中的细胞数量不等，可以每接种几个孔就混匀一下。培养板周围一圈孔培养基容易挥发，为了减少误差，建议培养板的四边每孔只加培养基，而不作为指标检测孔。

6.最佳细胞接种数量的选择，可以用不同的细胞数接种，然后加入 CCK-8 试剂，1 小时，2 小时，3 小时检测450nm 以 OD 值 1.0 左右为标准选择细胞数。

7.有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。加 CCK- 8 试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基液面下加，容易产生气泡，会干扰 O.D 值读数。

8.如果不是使用 96 孔板检测，CCK-8 溶液的用量相应等比例增加即可。

9.本试剂盒用于细菌的检测，不可用于酵母检测。

10.CCK-8 试剂加样量较小时，也可以用培养基稀释 CCK-8 试剂后加样以减小误差。

11.本试剂无细胞毒性，可以在检测后进行细胞培养，也可以再进行其他检测。

12.某些实验中吸光度值太高，可以减少细胞数量，或者缩短加入 CCK-8 后的培养时间。

13.如果 OD 值偏低，可以适当增加细胞数量或延长加入 CCK-8 后的培养时间。

14.接种细胞时要充分重悬，接种均匀。细胞是否接种均匀对结果影响较大。

15.OD 值在 0.5-2.0 之间均可，最大值控制在 1.0 左右最佳，小于 0.5 或大于 2.0 请调整接种量和培养时间。

16.如果细胞数据出现异常增加，或者数据结果的方向相反等问题，可能是实验中产生了气泡、铺板不均匀等

操作问题，请重复实验。

1. 制备适当浓度微生物细胞的悬液，在 96 孔板内每孔接种 190μl 悬液。

2. 每孔加入 10μl 的染色溶液。

3. 将培养板在培养箱中培养（37℃或合适的温度）。

4. 用酶标仪测定在 450nm 处的吸光度。

细胞活力计算：

各重复孔的 OD 值取平均数。 

细胞活力% =（测试孔 OD-空白 OD/对照孔 OD-空白 OD）×100

注意事项：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。