细胞衰老检测试剂盒 / Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit

产品简介：

细胞衰老（Cell senescence）是细胞控制其生长潜能的保障机制，一般含义是复制衰老（Replicative senescence，RS），指正常细胞经过有限次数的分裂后，停止分裂，此时细胞虽然是存活的，但是细胞形态和生理代谢活性发生明显变化的现象。

 体外衰老细胞研究常用的生物学特征包括：1）不可逆的生长停滞；2）与衰老相关的 β-半乳糖苷酶（senescence associated β-galactosidase, SA β-gal）的活化。作为溶酶体内的水解酶，通常在 pH 4.0 的条件下表现活性。但是衰老细胞内其在 pH 6.0 的条件下表现活性，且随着传代次数的增加，细胞群体中表现衰老相关的 β-半乳糖苷酶的细胞数目逐渐增加。

 细胞衰老试剂盒正是基于 SA β-gal 活性变化的生物学特征而设计的，专门用于对衰老细胞或组织进行染色检测。本试剂盒以 X-Gal 为底物，通过细胞内 SA β-gal在酸性条件下稳定表达，催化底物生成蓝色产物，从而在光学显微镜下观察颜色变化以分析细胞的衰老状况。

 本试剂盒适用于人和各种动物体外培养细胞的衰老检测。产品性能稳定，参数经优化，着色敏感。仅对衰老细胞进行染色，不会染色衰老前的细胞（presenescent cells）、静止期细胞（quiescent cells）、永生细胞（immortal cells）或肿瘤细胞。

产品应用：

光学显微镜

使用方法：

1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2.试剂 A 有腐蚀性，操作时要小心。

3.试剂 C2 刚溶解时可能会有沉淀，充分混匀或者漩涡震荡使沉淀全部溶解，之后用于染色实验

4.试剂 C2 需要避光保存。染色工作液也需要避免光照。

5.染色后的细胞样品可以在 4ºC 冰箱保存，需避免光照。

6.细胞 β-半乳糖苷酶活性强，孵育 3 h 即显示阳性；细胞 β-半乳糖苷酶活性弱，则需要孵育最长至 24 h。细胞染色孵育时间应根据不同细胞样本情况经预实验后选定为 3-24 h。

7. 细胞衰老 β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的 pH 值，不能用于细胞培养的 CO2 培养箱中进行染色反应。因为 CO2 培养箱中较高浓度的 CO2 会影响染色工作液的 pH 值，导致染色失败。

8.避免使用细胞状态极差的细胞或过度传代的细胞，可能导致假阳性。

1. 染色工作液配制

实验开始前，将试剂盒内各组分从冰箱内取出，置于室温回温 15-20 分钟。按以下染色工作液配方，根据实验体系类型，检测样本数，统一配制单次实验需要的染色工作液总量。混匀后，置入 37ºC 恒温水槽里预热，即为染色工作液。

1.1 将染色剂 C2 粉剂用染色液 C1 充分溶解混匀。配成染色液 C。

1.2 将 300ul 染色液 C 加入 10ml 染色液 B 中，充分混匀。配成染色工作液。

2. 细胞染色

2.1 贴壁细胞：（96 孔板为例）

1） 吸除细胞培养液，用 0.1ml 洗涤液 E 洗涤 1 次，加入 0.1ml 固定液 A，覆盖整个生长表面。室温固定 5 分钟。

2） 吸除固定液 A，用 PBS 洗涤细胞 3 次，每次 3 分钟。

3） 吸除 PBS，每孔加入 0.1ml 预热的染色工作液，覆盖整个生长表面。

4） 37℃孵育 4 小时～24 小时，或直到细胞呈现蓝色，可以用封口膜或保鲜膜封住细胞培养板防止液体蒸发。

5） 普通光学显微镜下观察和计数：表达 SA β-gal 的细胞为阳性细胞，呈现蓝绿色。

2.2 悬浮细胞染色：

1） 离心收集细胞至 1.5ml 离心管内，用 0.1ml 洗涤液 E 洗涤 1 次，加入 0.1ml 固定液 A，覆盖整个生长表

2） 离心，吸除细胞固定液，用 PBS 洗涤细胞 3 次，每次 3 分钟。

3） 离心，吸除清洗液 A，每管加入 0.1ml 预热的染色工作液。

4） 37℃孵育 3 小时～15 小时，或直到细胞呈现蓝色（注：避免液体蒸发）。

5） 取部分染色好的细胞，滴加到载玻片上或 6 孔板内，普通光学显微镜下观察和计数。

2.3 组织切片染色：

1） 对于石蜡切片先按照常规方法进行脱蜡或水化处理。对于冰冻切片直接按照以下步骤进行；

2） 加入适当体积的固定液 A，以充分盖住组织为宜，室温固定不少于 15 分钟。

3） 用洗涤液 E 浸泡洗涤组织 1 次，用 PBS 洗涤 2 次，每次不少于 5 分钟；

4） 吸除 PBS，加入适当量的预热的染色工作液。

5） 37℃孵育过夜，可以用封口膜或保鲜膜封住防止蒸发，也可以把整个切片浸泡在染色工作液中。

6）普通光学显微镜下观察和计数。

注意事项：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。