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淀粉分支酶(SBE)测试盒 BES-BK2385B

淀粉分支酶(SBE)测试盒

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淀粉分支酶(SBE)测试盒

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

SBE(EC 2.4.1.18)主要存在于植物中,是参与支链淀粉合成的关键酶,测定 SBE 活性在淀粉生物合成、优质农作物品种选育和品质遗传改良研究中具有重要意义。

测定原理

直链淀粉和碘结合后在 660nm 有特征光吸收,SBE 使直链淀粉含量减少,从而降低了淀粉碘复合物在 660nm 吸收值,一定时间内吸光度下降的百分率可以反映 SBE 活性。

需自备的的仪器和用品

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、蒸馏水

试剂的组成和配制

提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;

试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1 支,4℃保存;临用前每支加入 1mL 蒸馏水,95℃沸水浴充分溶解后备用;用不完的试剂 4℃保存;

试剂三:液体 13mL×1 瓶,4℃保存;

试剂四:液体 1mL×1 瓶,4℃保存;

粗酶液提取

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL提取液),进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤

1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长到 660 nm,蒸馏水调零。

2、加样表

2021091507384236788

混匀,室温静置 10min,取 200uL 至微量石英比色皿或 96 孔板中,660nm 处读取各管吸光值。每个测定管需设个一个对照管。

注意:

1、可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进行 5min 95℃沸水浴处理。

2、试剂二如有沉淀,务必沸水浴溶解后使用。

SBE 活力单位的计算

1、按照蛋白浓度计算

单位的定义:以波长 660nm 的吸光度下降百分率表示,每 mg 蛋白在反应体系中每降低 1%碘蓝值为一个酶活性单位。

SBE 活性(U/mg prot)=( A 对照管-A 测定管)/A 对照管÷Cpr ×100

2、按照样本鲜重计算

单位的定义:以波长 660nm 的吸光度下降百分率表示,每 g 组织在反应体系中每降低 1%碘蓝值为一个酶活性单位。

SBE 活性(U/g 鲜重)=(A 对照管-A 测定管)/A 对照管÷(W÷V 样总)×100V 样总:提取液总体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g。


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