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酸性木聚糖酶测试盒 BES-BK2326B

酸性木聚糖酶测试盒

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酸性木聚糖酶测试盒

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生,能催化水解木聚糖,也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶,可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及 β-葡聚糖,降低酿造中物料的粘度,促进有效物质的释放,以及降低饲料中的非淀粉多糖,促进营养物质的吸收利用,因而广泛的应用于酿造和饲料工业中,ACX 一般分离自耐酸的真菌,细菌及部分霉菌。

测定原理

ACX 在酸性环境下能将木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,进一步在沸水浴条件下与 3,5-二硝基水杨酸发生显色反应,在 540nm 处有特征吸收峰,反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比,通过测定反应液在 540nm 吸光值增加速率,可计算 ACX 活力。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、恒温水浴锅,可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制

缓冲液:液体 90mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 12mL×1 瓶,4℃避光保存。(若出现白色絮状或颗粒状沉淀,可 60℃加热溶解后使用)。

试剂二:液体 18mL×1 瓶,4℃避光保存。

粗酶提取

1. 发酵液:发酵液于 8000g,4℃,离心 15min,取上清,作为待测样品。

2. 酶干粉:称约 0.1mg,加 1mL 缓冲液溶解待测。

3. 组织样本:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g组织,加入 1mL 缓冲液)进行冰浴匀浆,然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清待测。

测定操作表

2021091510161131294

ACX 计算公式

标准曲线:y = 2.5554x - 0.002 ,R2 = 0.9983

1. 按液体体积活力计算:

酶活定义:50℃,pH4.8 条件下,每毫升液体样本每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。

ACX 活力(nmol/min/mL)= (ΔA+0.002)÷2.5554÷150÷T×稀释倍数×106= 435× (ΔA+0.002) 

2. 按蛋白浓度计算:

酶活定义:50℃,pH4.8 条件下,每毫克蛋白每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。

ACX 活力(nmol/min/mg prot)= (ΔA +0.002)÷2.5554÷150÷T×稀释倍数×106÷Cpr= 435×(ΔA +0.002 ) ÷Cpr

3. 按鲜重计算:

酶活定义:50℃,pH4.8 条件下,每克样本每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。

ACX 活力(nmol/min/g 鲜重)= (ΔA +0.002)÷2.5554÷150÷T×稀释倍数×106÷W= 435×(ΔA +0.002 ) ÷W150:木糖的分子量;T:反应时间,30min;稀释倍数=V 反总÷V 样=1000µL÷200µL=5;106:转化因子,即 1mg/mL=106ng/mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g。

注意事项

1. 吸光度变化应该控制在 0.01~0.8 之间,否则加大样品量或稀释样品,注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。

2. 试剂盒 2-8℃保存,保质期 3 个月,建议尽快使用。


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