副牛痘病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

【产品名称】

英文名称：Paravaccinia Virus

中文名称：副牛痘病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

【包装规格】

50T/盒

【预期用途】

副牛痘病毒(Paravaccinia Virus)是一种RNA病毒，会引起副牛痘，是挤奶员挤奶时接触假牛痘病毒所致的病毒性皮肤病，开始在手前臂出现单个或数个炎性丘疹，后变紫红色半球形结节，其周围有红晕，中心呈脐窝状，质地坚韧，为黄豆大小，表面光滑，散在分布，互不融合。有时顶部有1个水疱或脓疱，以后结痂或者渐渐发展成为乳头瘤状淡红色皮损，类似化脓性肉芽肿，因此副牛痘病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。本产品基于PCR原理开发。它具有下列特点： 

1.一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。

2.根据副牛痘病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。

3.基于染料法qRT-PCR检测，灵敏度比常规RT-PCR高10-100倍，可以达到至少1000拷贝/反应。

4.使用一管式qRT-PCR技术，RT和PCR两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。

本产品足够50次30μL体系的RT-PCR，只能用于科研，不能用于临床。

【检验原理】

本试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光 PCR 技术，针对副牛痘病毒的基因高度保守区域设计特异性引物，用荧光 PCR 技术对副牛痘病毒的核酸进行体外扩增检测，在反应体系中含副牛痘病毒核酸模板的情况下，PCR 反应得以进行并释放荧光信号，利用仪器对PCR过程中相应通道的信号强度进行实时监测和输出，实现检测结果的定性、定量分析。

【试剂组成】

说明：

1）不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

2）试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。

3）自备：无 DNA/RNA 酶的 1.5mL 离心管，0.2mL PCR 反应管，滤芯吸头(规格:10μL，200μL，1000μL)，离心机，振荡混合器，各种规格的移液器。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融少于 7 次，有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【样品要求】

1. 根据实际情况可采取采取全血、血清、血浆，口腔样本，唾液、咽喉部鼻孔眼部和病毒培养物作为检测样本，具体参考《临床微生物样本采集规范》。

2. 应避免样本间交叉污染，样本采集后应及时检测，也可保存于-20±5℃待检，长期保存应置于-70℃以下。

【样品保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过6个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

【使用方法】

1. 样品处理（样本处理区）

1.1 样本前处理

取待检测样本 200ul，加入 1.5ml 离心管中，用 DNA 核酸提取试剂盒进行提取即可。

1.2 RNA 提取

根据您实验室的具体情况和样品类型，选择适当的提取策略方法。为了使实验结果稳定、有效、可靠，我们建议使用商品化的试剂盒进行提取，严格按照对应试剂盒说明书进行操作，样本核酸提取过程中应避免污染，提取好的模板样品如不能立即检测，建议-15℃以下保存。

推荐采用我们公司研发生产的RNA提取试剂盒：RaPure病毒RNA提取试剂盒

2. 试剂配制（试剂准备区）

2.1 从-15℃以下冰箱中取出试剂盒平衡到室温（20～25℃），注意避免强光照射，待完全溶解后振荡混匀并低速离心 10 s，使用低吸附吸头分液取样，避免试剂损失和浪费。

2.2 根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：

2.3 在适当容积的无菌离心管中加入上述试剂，充分振荡混匀后 2000 rpm 离心 10 s，按照 20 μL/管分装量将试剂分装至八联 PCR 反应管中。

2.4 盖紧八联 PCR 反应管盖， 并注意做好相应标识（请标记在八联 PCR 反应管盖两端突出部位，切勿标记在八联 PCR 反应管盖中间，以免影响信号采集）。将 PCR 反应管转移至样本准备区，剩余试剂放回-15℃以下冰箱冷冻保存。

3. 加样（样本处理区）

将步骤 1 提取的 RNA、阳性质控品、阴性质控品各取 5μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心，核酸加样过程中应避免污染。

4. PCR 扩增（核酸扩增区）

4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；

4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；荧光通道选择：检测通道 SG，荧光染料法(SYBR Green I)，请勿选择 ROX 参比荧光。

4.3 推荐循环参数设置：

5. 结果分析判定

注意事项：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。