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雷斯顿埃博拉病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 BES23470GDK

Reston Ebola Virus雷斯顿埃博拉病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

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¥ 4490.00 /盒
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雷斯顿埃博拉病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

【产品名称】

中文名称:雷斯顿埃博拉病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

英文名称:Reston Ebola Virus RT-PCR Kit

【包装规格】

50T/盒

【检验原理】:

本试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术,设计一对雷斯顿埃博拉病毒特异性引物,结合一条特异性探针,用一步法荧光RT-PCR技术对雷斯顿埃博拉病毒的核酸进行体外扩增检测。

【包装规格及成分】

编号

成分

规格

试剂一

雷斯顿埃博拉病毒扩增液

50μL×1管

试剂二

雷斯顿埃博拉病毒反应液

950uL×1管

试剂三

雷斯顿埃博拉病毒阳性质控品(5.59E+04)

50μL×1管

试剂四

雷斯顿埃博拉病毒阴性质控品

50μL×1管

产品说明书

1份

注:

1) 不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

2) 试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。

3) 自备:无DNA/RNA酶的1.5mL离心管,0.2mL PCR反应管,滤芯吸头(规格:10μL,200μL,1000μL),离心机,振荡混合器,各种规格的移液器。

4) 禁止与其他品牌/自配的试剂混用,否则会影响使用效果。

【储存条件及有效期】:

1.试剂盒应置于-15℃以下冷冻避光储存;有效期12个月,采用泡沫盒加生物冰袋密封运输,温度不超过8℃,生产日期及有效期详见外包装盒。

2.试剂盒避免反复冻融,冻融次数不超过5次,开封后-15℃以下冷冻避光储存,不影响有效期内使用。

【适用仪器】:

ABI、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。

【标本采集】:

1.根据实际情况可采取病毒/组织/血液等样品1g作为检测样本

2.应避免样本间交叉污染,样本采集后应及时检测,也可保存于-20±5℃待检,长期保存应置于-70℃以下。

【样本保存及运输】:

上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过6个月,标本运送应采用2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。

【使用方法】:

1.样品处理(样本处理区)

1.1样本前处理

1)组织样品:每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g,手术剪剪碎混匀后取0.5g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中;

2)全血样本:待血凝固后,取血清100μL于1.5mL灭菌离心管中。

1.2核酸(RNA)提取

根据您实验室的具体情况和样品类型,选择适当的提取策略方法。为了使实验结果稳定、有效、可靠,我们建议使用商品化病毒DNA/RNA提取试剂盒进行提取,严格按照对应试剂盒说明书进行操作,样本核酸提取过程中应避免污染,提取好的模板样品如不能立即检测,建议-15℃以下保存。

推荐采用我们公司研发生产的病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒

2.试剂配制(试剂准备区)

2.1从-15℃以下冰箱中取出试剂盒平衡到室温(20~25℃),注意避免强光照射,待完全溶解后振荡混匀并低速离心10 s,使用低吸附吸头分液取样,避免试剂损失和浪费。

2.2根据待检测样本总数,设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照;样品每满7份,多配制1份),每测试反应体系配制如下表:

试剂

雷斯顿埃博拉病毒反应液

雷斯顿埃博拉病毒扩增

用量(样本数为N)

19μL

1μL

2.3在适当容积的无菌离心管中加入上述试剂,充分振荡混匀后2000 rpm离心10 s,按照20μL/管分装量将试剂分装至八联PCR反应管中。

2.4盖紧八联PCR反应管盖,并注意做好相应标识(请标记在八联PCR反应管盖两端突出部位,切勿标记在八联PCR反应管盖中间,以免影响信号采集)。将PCR反应管转移至样本准备区,剩余试剂放回-15℃以下冰箱冷冻保存。

3.加样(样本处理区)

将步骤1.2提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取5μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心,核酸加样过程中应避免污染。

4.PCR扩增(核酸扩增区)

4.1将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内,并记录放置顺序;

4.2设置好通道、样品信息,反应体系设置为25μL;

4.3荧光通道选择:检测通道选择FAM,淬灭通道选择NONE,参比荧光选NONE。

【推荐循环参数设置】:

2022112803584735622

5.【结果分析判断】

5.1结果分析条件设定

设置Baseline和Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节Baseline的start值(一般可在3~15范围内调节)、stop值(一般可在5~20范围内调节),以及Threshold的Value值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

5.2结果判断

1)阳性:检测通道Ct值≤35.0,且曲线有明显的指数增长曲线。

2)可疑:检测通道Ct值>35.0,且出现典型扩增曲线的样本建议重复试验,重复试验结果出现Ct值≤38.0和典型扩增曲线者为阳性,否则为阴性。

3)阴性:检测结果Ct值无Ct值,无明显的扩增曲线。

6.【质控标准】

1)阴性质控品:无明显扩增曲线或无Ct值显示;

2)阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且Ct值≤30;

3)以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

7.【产品性能指标】

1)阴阳性参考品符合率:5份阳性参考品符合率为100%;10份阴性参考品符合率为100%。

2)最低检测限:1.0×103copies/mL。

3)精密度:批内、批间精密度检测Ct值的变异系数(CV)均小于等于3%。

注意事项:该产品仅供科研实验使用,未经允许不得用于其它用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。


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