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外泌体提取和RNA分离试剂盒(血清或血浆)BES2001REXO

是由不同细胞分泌的直径 30-150nm 的胞外膜性囊泡 (Extracellular Vesicles,EVs)。

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¥ 2250.00 /盒
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外泌体提取和RNA分离试剂盒(血清或血浆)

保存与应用 

【保存条件】 

本试剂盒 2-8℃下运输,室温或 2-8℃下保存至少十二个月,按照试剂盒不同成 分分别保存,使用前请详细阅读说明书,使用前需恢复室温并充分混匀。

【应用范围】

本产品只用于科学研究,不能用于临床诊断。

产品介绍

外泌体(Exosome)是由不同细胞分泌的直径 30-150nm 的胞外膜性囊泡 (Extracellular Vesicles,EVs)。外泌体普遍存在于多种体液中,其内容物丰富, 包括蛋白质、脂质和核酸等,在细胞间信息交流中发挥着重要作用,主要参与免 疫抗原呈递,神经递质传递,脂类代谢及细胞信号转导等过程,并与多种疾病的 发生、发展、治疗及预后密切相关。

研究表明,胞外膜性囊泡(包括外泌体)内容物中富含不同类型 RNA(mRNA 和 microRNA 等)。microRNA(miRNA)在基因转录和转录后调节方面起重要作 用,与疾病的发生、发展密切相关,因此,某些外泌体 miRNA(exo-miRNA)可 以作为疾病的新的治疗靶标和诊断生物标记物。

研发的外泌体提取和 RNA 分离试剂盒,能够简单、快速地捕获生 物样本中外泌体,并高效分离外泌体中的 RNA(包括 miRNA)。其主要原理是 依据外泌体的膜结构特点(脂质双分子层),设计和修饰特异结合外泌体的树脂, 通过与外泌体脂质双分子层组成成分结合,而几乎不与样本中其它蛋白质结合来 实现外泌体的提取和纯化,采用酚/胍盐方法提取已分离的外泌体中总 RNA(包 括 miRNA),利用核酸特异吸附柱,可方便、快捷地纯化外泌体 RNA,获得的 RNA 可直接用于下游应用,如 realtime RT-PCR,Northern blot,芯片表达谱分析, NGS 测序等。

试剂盒组成和说明

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*使用前先在每瓶洗涤液 A (Wash Solution A)中加入 45ml 无水乙醇,混匀,并在瓶标签 上标记“√”,每次使用后立即盖紧瓶盖。 

【注意事项】

  1. 各产品组分根据要求在合适的温度下保存,自购买之日起有效期至少半年。 试剂盒在使用前先恢复室温,裂解液 A 在使用前检查是否有盐沉淀,建议在 使用前 37℃水浴 10 分钟,混合均匀,无沉淀,溶液清澈。

  2. 本试剂盒只适用于血清或血浆样本。

  3. 本试剂盒每个反应是基于 0.5ml 血清或血浆作为起始体积,样本不足时,需要用无核酸酶水补充至 0.5ml ,但样本量不要低于 200μl。

  4. 本试剂盒所有离心均在室温下进行。

  5. 预防 RNase 污染,应注意以下几方面:

经常更换新手套,防止皮肤表面 RNase 污染。 

使用无 RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。 

RNA 释放后在裂解液中不会被 RNase 降解,但提取后继续处理过程中应使 用不含 RNase 的塑料盒或玻璃器皿,玻璃器皿可在 150℃烘烤 4h,塑料器皿 可在 0.5M NaOH 中浸泡 10 min,然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去除 RNase。 

配制溶液应使用无 RNase 的水(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入 DEPC 至 终浓度 0.1%(v/v),放置过夜,高压灭菌)。 

6. 需要自备试剂:96-100% 乙醇。

操作方法

1. 样本预处理

对于冻存血清或血浆,室温或 25℃水浴解冻,将完全融化的样品置于冰上; 对于新鲜血清或血浆,收集样品后置于冰上,12,000×g,离心 15min,去除细胞 或细胞碎片,离心后将上清吸入新管中。

注意:试剂盒在使用前需恢复室温。

2. 纯化柱平衡

吸取 500μl 平衡缓冲液加入外泌体纯化柱中(已放入收集管),500×g 离心 2min,弃去滤液,外泌体纯化柱重新放入收集管中,待用。

3. 外泌体结合

吸取 500μl 处理的血清或血浆放入 5.0ml 离心管中(试剂盒不提供),加入 结合缓冲液 1.5ml,颠倒混匀后静置 2min,然后将混合液分 3 次(每次大约 700μl) 加入已平衡的外泌体纯化柱中(已放入收集管),500×g 离心 2min,每次倒掉滤 液。

4. 外泌体洗涤

吸取 0.5ml 洗涤缓冲液加入外泌体纯化柱中(已放入收集管),500×g 离心 2min,然后再 1,500×g 离心 4min,弃去滤液和收集管。

5. 外泌体 RNA 释放

注意:裂解液 A 在使用前应恢复室温,为了提高提取效率建议裂解液 A 使用前 37℃水浴 10 分钟后使用。

将外泌体纯化柱放入新的 2.0 ml 无 RNase 的离心管中(试剂盒不提供),加 入 600μl 裂解液 A,150×g 离心 2min,然后 5,000×g 离心 2min,弃外泌体纯 化柱,滤液涡旋震荡 30s,室温静置 5min,使得核酸蛋白复合物完全分离。 

将得到的裂解产物加入 150μl 裂解液 B,盖好管盖,剧烈振荡 30sec,室温放 置 5min。室温 12,000×g 离心 15min,样品会分成三层:黄色的有机相,中 间层和无色的水相,RNA 主要在水相中(上层),把水相(避免吸取中间层) 转移到新的 1.5ml 无 RNase 离心管中(试剂盒不提供),进行下一步操作。 

量取转移液的体积,缓慢加入 1.5 倍体积预冷的无水乙醇(如 400μl 的转移 液加 600μl 无水乙醇),颠倒混匀(此时可能会出现沉淀)后室温静置 5-10min。 

6. 外泌体 RNA 结合 

将得到的溶液和沉淀一起转入 RNA 吸附柱中(已放入收集管中),每次上 柱体积不得大于 700μl,可分 2 次完成,室温静置 2min,室温 8,000×g 离心 30sec, 离心后弃掉滤液,保留 RNA 吸附柱。 

7. 外泌体 RNA 洗涤 

向 RNA 吸附柱加入 500μl 洗涤液 A(请检查是否已加入指定量的无水乙醇), 室温静置 2min,室温 8,000×g 离心 30sec,倒掉收集管中的滤液,将吸附柱放入 收集管中,重复洗涤 1 次。将空柱于室温 12,000×g 再离心 2min,去除残余液体。 打开 RNA 吸附柱盖子,将 RNA 吸附柱置于室温放置 5-10min,以彻底晾干吸附 材料中残余的洗涤液。 注意:这一步的目的是将吸附柱中的残余的洗涤液去除,洗涤液中的乙醇的残留会影响后 续的酶反应(酶切、PCR 等)实验。 

8. 外泌体 RNA 洗脱 

将 RNA 吸附柱转入新的无 RNase 的 1.5 ml 离心管中(试剂盒提供),向 RNA 吸附柱中间位置悬空滴加 50-200μl 洗脱液 A,室温放置 2min,室温 12,000×g 离心2min,离心得到的溶液再加入吸附柱中,室温放置2min,12,000×g离心2min, 最后离心管中液体为提取的外泌体RNA,可直接应用于下游实验或保存在-80℃。 注意:洗脱液体积不应小于 50μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的 pH 对于洗脱效率有 很大影响,若用水做洗脱液应保证 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率, 且 RNA 产物最好立即使用,或保存在-80℃,以防止 RNA 降解。

用途:该产品仅验使用,未经允许不得用于其它用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。



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