SuperEV 超纯尺寸排阻色谱柱 1.0mL 

保存与应用 

【保存条件】 

常温或 4℃运输，收到试剂盒后直立放置，置于 2-8℃保存，有效期 12 个月。请 勿冷冻！ 

【应用范围】

本产品只用于科学研究，不能用于临床诊断。 

1. 本产品是基于尺寸排阻色谱原理，根据被分离组分的分子大小实现胞外囊泡 （EVs）的分离和纯化。

2.适合大部分生物样品（血清、血浆、尿液等）和细胞培养上清中分离和纯化 EVs。 

3.分离的 EVs 可用于鉴定（NTA，TEM，FACS 和 Western Blot），蛋白质谱分析， RNA 提取和测试，高通量测序，体外标记和修饰及细胞实验等。

产品介绍

外泌体(Exosome)是由不同细胞分泌的直径 30-150nm 的胞外膜性囊泡 (Extracellular Vesicles，EVs）。外泌体普遍存在于多种体液中，其内容物丰富， 包括蛋白质、脂质和核酸等，在细胞间信息交流中发挥着重要作用，主要参与免 疫抗原呈递，神经递质传递，脂类代谢及细胞信号转导等过程，并与多种疾病的 发生、发展、治疗及预后密切相关。 

尺寸排阻色谱法（Size Exclusion Chromatography，SEC）被认为是从不同样 本中分离和纯化细胞外囊泡（EVs）的最佳方法之一，因为它能够快速而有效地 将 EVs 从复杂样本中分离出来，并能保持 EVs 的原始形状和生物学功能。我们 开发了用于分离 EVs 的不同类型的 SEC 柱：SuperEV0.5，SuperEV1.0 和 SuperEV3.0，适合不同样本和体积的 EVs 分离。此外，我们还提供 SEC 柱和浓 缩柱的不同组合，既可以从更大体积的细胞培养上清或尿液中分离 EVs，同时又 可以将 SEC 柱分离的 EVs 进一步浓缩和纯化，提供完整的纯净 EV 的解决方法， 适合于 EVs 的工业化制备。
【主要特性】

* 建议样品上样量为 1.0mL，以获得高纯度和高回收率的 EVs，上样量最高可达 1.5mL， 但后面馏分的 EV 纯度略有下降，具体参考“实验数据分析”中样品上样体积研究。
【主要特点】
 耗时短，分离时间约 15 分钟。
 操作简便，无需特殊设备。
 重复性好，可重复使用 5 次。
 操作温和，最大程度保持胞外囊泡（EVs）完整形态结构和生物学功能；
 回收率高，大于 74%。
 纯度高，总蛋白去除约 99.9%，脂颗粒去除约 90%。
 操作过程仅加入 PBS 缓冲液，对下游实验无干扰。

试剂盒组成和说明

需自备试剂 

1. PBS 缓冲液，经 0.22μm 滤膜过滤
2. 纯水，经 0.22μm 滤膜过滤
3. 20%乙醇水溶液
4. 超滤管（截留分子量为 100KD）
5. 收集管（烧杯，普通离心管）

操作方法

1. 柱平衡
从冰箱中取出 SuperEV 1.0 超纯柱，垂直固定，如果无合适的垂直固定装置， 可从我公司购买配套的固定组件（货号：HCS1030 ）。室温放置至少 30 分钟， 使柱子温度充分平衡到室温（18-28℃），温度过高过低，柱体可能会引入气泡， 影响分离效果。使用的 PBS 缓冲液，同样平衡至室温。
注意：
 柱子平衡至室温前，不要打开顶盖和底盖。
 柱子第一次使用，上筛板与填料表面可能存在间隙，这是储存过程中填料沉降造成的， 不影响分离性能，实验前将筛板向下垂直推到填料表面即可。  尽量用当天新配的 PBS, 经 0.22μm 膜过滤，避免引入微生物和颗粒物，以免堵塞筛板。

将收集管（烧杯或普通离心管）放置在柱子下方，先打开顶盖，用移液器吸弃上方的保存液，加入约 10mL 超纯水（经 0.22μm 滤膜过滤），取下底盖冲洗柱子，待液体全部进入筛板，出口无液体流出，继续加入 40mL PBS 冲洗。整个冲洗过程始终保持顶部筛板湿润，避免柱体变干。冲洗完成后，盖上底盖，加入少量 PBS 等待后续操作

1. 样本预处理
样品上样量

样品处理

3. 样品上样和 EVs 收集

用移液器吸弃筛板上方的 PBS，取下柱子底盖，在筛板上方加入不超过 1.5mL（最适 1.0mL）的样品，柱子下方放置 15mL 离心管进行第 1 馏分的收集。 待样品全部进入筛板后，再加入一定量的 PBS（PBS 量=8mL-样品上样量）。待 液体全部进入筛板下方，出口无液体流出，收集完毕。收集的第 1 馏分为空隙体 积，大约 8mL，该馏分不含 EVs。

注意：
 加入样品后，必须等所有样品进入筛板后，才能继续加入 PBS，避免样品被稀释。
 加入 PBS 的量为 8.0mL-样品上样体积，如上样量为 1.0mL 时，加入 PBS 7.0mL，上 样量为 1.5mL 时，加入 PBS 6.5mL。
继续加入 PBS 进行洗脱，用 1.5mL 离心管收集馏分。每次加入 1.0mL PBS， 待洗脱液全部进入筛板后，出口无液体流出时，该馏分收集完毕。再加入下一个 1.0mL PBS 进行收集。每个馏分收集体积为 1.0mL。EVs 主要集中在馏分 2-4， 总体积约为 3.0mL。
注意：
 整个洗脱过程始终保持顶部筛板湿润，避免柱体变干。
 不同类型样品可能会有不同的洗脱谱和纯度，建议初次使用时，对收集的馏分做 EVs 和蛋白浓度测定。
4. 柱体冲洗
含 EVs 的馏分收集完毕后，用不少于 36mL PBS 对柱体进行冲洗，冲洗后的 柱子可直接用于下一个样品处理，或加入保存液，2-8℃储存。
保存液：20%乙醇或 0.05%（W/V）叠氮钠水溶液。 注意：当分离的 EVs 馏分用于 RT-PCR 或高通量测序时，为避免交叉污染，建议一根柱子 只用一次或仅重复用于同一样品。
5. 清洗和再生
变性蛋白或脂蛋白在柱子冲洗过程中可能无法完全被洗脱，积累过多会对分 离的纯度产生影响，可按以下方法进行再生：24 mL 0.5M NaOH 清洗，然后用 PBS 冲洗柱子，直至流出液 pH 为中性，一般需 50-70mL PBS 缓冲液。
注意：当柱子颜色有变化或流速明显下降时，建议进行清洗和再生。
6. EVs 馏分浓缩（富集）
收集到的 EVs 馏分可做 EVs 浓度和蛋白浓度直接测定，根据实验需要决定 是否浓缩或富集。若需要浓缩或富集，建议采用截留分子量为 100KD 超滤管， 2,000×g 离心浓缩，如 Millipore Amicon Ultra-15ml (MWCO 100kD) 或 Sartorius Vivaspin 4/15 ml (MWCO 100kD)，也可从我公司直接购买配套的 15mL 超滤管，或“细胞培养上清外泌体浓缩试剂盒”进行浓缩。

用途：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。