细菌膜囊泡分离试剂盒（细菌培养基）

保存与应用 

【保存条件】 

本试剂盒低温下运输，2-8℃下可保存 12 个月，使用前各试剂需充分混匀。

【应用范围】

本产品只用于科学研究，不能用于临床诊断。 

本试剂盒仅适用于细菌培养上清液中囊泡的分离，可应用于囊泡的鉴定（NTA， TEM，Western Blot），核酸提取等。

产品介绍

大多数细菌均释放膜囊泡（Membrane Vesicles,MVs），直径 200-400nm，其 内含物含有特定分子，具有不同的功能，包括毒力因子的运输，水平 DNA 的转 移，宿主防御因子等，在细菌及细菌宿主之间的交流起重要作用[1]。MVs 最初 被发现是来源于革兰氏阴性菌外膜的膜性小泡，称为外膜囊泡（Outer Membrane Vesicles，OMV），然而，研究表明，革兰氏阳性菌也能产生 MVs，除 OMV 外， 还存在不同类型的 MVs，比如可由内溶素引发的细胞溶解形成的 MVs 等[2]。研 究人员利用 OMV 研究宿主细菌在发病机制、癌症治疗、调节宿主免疫应答和作 为疫苗的工程等方面的相互作用[3-5]。 为了快速分离细菌来源的 MVs，在研发外泌体分离的经验基础上， 结合细菌 MVs 的结构特点，研发出“细菌膜囊泡分离试剂盒”，适合于革兰氏阴 性菌和革兰氏阳性菌产生的不同囊泡。该试剂盒是基于亲和树脂层析原理来捕获 细菌培养基中各种膜性囊泡，具有高产量和高纯度特性，提供除了超速离心方法 之外的另一种选择。 此试剂盒有不同规格，一次可处理 10ml 或 40ml 细菌培养基，操作简单， 适合常规实验室的囊泡研究，分离的 MVs 可用于粒径分析，核酸提取，Western Blot 等。

试剂盒组成和说明

操作方法

1. 样本预处理

对于冻存的细菌培养上清，室温或 25℃水浴解冻，将完全融化的样品置于 冰上；对于新鲜的细菌培养上清，收集样品后置于冰上，5,000×g，4℃离心 20min， 将上清液转移新的离心管中，再次 5,000×g，4℃离心 20min 彻底去除细菌和细 菌碎片，收集上清液，待用

2. MVs 树脂捕获

吸取 10ml 上述处理的培养基上清于 15ml 离心管中（试剂盒不提供），加入 1.0ml 的结合缓冲液，盖紧盖子，颠倒混匀。吸取 400μl 结合树脂（吸取前彻底混匀结合树脂，快速吸取）加入步骤 2 的15ml 离心管中，盖紧盖子，室温颠倒混匀 15min 后，3,000×g，室温离心 2min。轻轻将离心管从离心机中取出，留取 1.0mL 上清，将剩余上清液体慢慢倒掉，将留取的 1.0mL 上清液体和结合树脂混合并全部转移至纯化柱（带有收集管） 中，3,000×g，室温离心 2min，弃掉收集管中的收集液。

3. MVs 洗涤

取 1.0ml 洗涤液加到离心柱中，室温静置 3min，3,000×g，室温离心 2min， 将收集管和收集液一并弃掉。

4. MVs 洗脱

将纯化柱放入低吸附蛋白的 15ml 离心管中（试剂盒提供），加入 400μl 洗 脱液，室温静置 5min，500×g，室温离心 2min，将滤液转移至纯化柱中，室温 静置 5min，3,000×g，室温离心 2min。离心管中所得液体即为浓缩后的外泌体溶 液。提取的细菌 MVs 可直接应用于下游实验，或者 2-8℃保存一周，或者-20℃ 或-80℃保存大约三个月。

用途：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。