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植物叶绿素(chlorophyll)含量试剂盒 BES-BK2241B

植物叶绿素(chlorophyll)含量试剂盒

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植物叶绿素(chlorophyll)含量试剂盒

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

植物叶绿素广泛存在于绿色植物组织中,其含量与光合作用、营养状况密切相关,是反应植物生长状况的重要指标。

测定原理

叶绿素 a 和叶绿素 b 在 645nm 和 663nm 处有最大吸收,根据经验公式可计算得叶绿素 a 和叶绿素 b 以及总叶绿素含量。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、10mL 玻璃试管、锡箔纸、丙酮。

试剂组成和配制

试剂一:粉剂×1 瓶,4℃保存。

测定操作

1. 提取液的准备:取 240mL 蒸馏水和 960mL 丙酮,充分混匀待用。

2. 称取约新鲜植物叶片或其它绿色组织,去掉中脉,称取约 0.1g,剪碎,用蒸馏水洗干净。

3. 加入 1mL 蒸馏水,少量试剂一(约 50mg),在黑暗或弱光条件下充分研磨,转入 10mL玻璃试管。

4. 用提取液冲洗研钵,将所有冲洗液转入玻璃试管,用提取液补充至 10mL,玻璃试管置于黑暗条件下或者包上锡箔纸浸提 3h,观察试管底部组织残渣完全变白则提取完全,若组织残渣未完全变白,继续浸提至其完全变白。

5. 取浸提液 200μL 于微量石英比色皿/96 孔板,提取液调零,测定 663nm 和 645nm 处吸光值,分别记为 A663 和 A645 。

计算公式

叶绿素 a 含量(mg/g 鲜重)=(12.7× A663 – 2.69 × A645)×V 提×D÷m÷1000 = 0.01×(12.7× A663 – 2.69 × A645)×D÷m

叶绿素 b 含量(mg/g 鲜重)=(22.9× A645 – 4.68 × A663)×V 提×D÷m÷1000 = 0.01×(22.9× A645 – 4.68 × A663)×D÷m

叶绿素总含量(mg/g 鲜重)=(20.21× A645 +8.02 × A663)×V 提×D÷m÷1000 = 0.01×(20.21× A645 +8.02 × A663)×D÷m

V 提:提取液体积,10mL;D:稀释倍数;m:样本质量,g

注意事项

1. 叶绿素对光敏感,研磨和提取等操作尽量避光或者在弱光下进行。

2. 一定要浸提至组织残渣完全变白,否则提取不充分。

3. 用提取液冲洗研钵一定要冲洗至所有的绿色物质被转移至玻璃试管。

4. 测定时吸光值超过 1,可进行适当稀释。


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