维生素E测试盒

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

维生素 E（Vitamin E）是一种脂溶性维生素，其水解产物为生育酚，是生物体中最主要的抗氧化剂之一，能阻止不饱和脂肪酸收到过氧化作用的损伤，维持不饱和脂肪酸细胞膜的完整性和正常功能，具有延缓衰老、预防溶血性贫血作用，在医药、化妆品、保健品、食品行业具有较高的应用价值。

测定原理

VE 还原 Fe3+为 Fe2+，Fe2+与 1,10-菲罗啉产生有色络合物，在 530nm 有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、漩涡震荡仪。

试剂组成和配制

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。

试剂四：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。

样本处理

1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.2g，加入 1mL提取液）加入提取液，充分匀浆后用提取液定至 2mL，在漩涡混匀仪上震荡 5min，于25℃，5000g 离心 10min，取上层测定。

2. 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 1000万细胞加入 2mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；在漩涡混匀仪上震荡 5min，于 25℃，5000g 离心 10min，取上层测定。

3. 血清：取 0.2mL，加 1.9mL 提取液，漩涡仪混匀上震荡 5min，于 25℃，5000g 离心 10min，取上层测定。

测定操作

计算公式

标准曲线：y = 0.022x + 0.0065， R2= 0.99781. 按照蛋白含量计算VE 含量（μg/mg prot）=（△A -0.0065）÷ 0.022×V 反总÷（V 样×Cpr）

 = 181.8×（△A -0.0065）÷ Cpr

2. 按照样本质量计算

VE 含量（μg/g 鲜重）=（△A -0.0065）÷ 0.022×V 反总÷（V 样×W÷V 样总） = 181.8×（△A -0.0065）÷ W

3. 按照细胞数量计算

VE 含量（μg/104cell）=（△A -0.0065）÷ 0.022×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总） = 181.8×（△A -0.0065）÷ 细胞数量

4. 按照液体体积计算

VE 含量（μg/mL）=（△A -0.0065）÷ 0.022×V 反总÷V 样×20 = 1818×（△A -0.0065）

V 反总：反应总体积，1mL；：V 样：加入样本体积，0.5mL；V 样总：加入提取液体积，2mL；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g

注意事项

1. 若反应体系产生沉淀，需要将样品进行适当的稀释，并在计算公式中乘以稀释倍数。

2. 最低检出限为 29.5μg/g。