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ATP含量测定试剂盒
产品说明：
ATP检测试剂盒（ATP Assay Kit）是一种特异灵敏的检测三磷酸腺苷（ATP）的试剂盒。生物机体内能量物质最终主要代谢为ATP，用于生物活动的能量消耗。通过定量检测ATP可以判断微生物污染、细胞增殖、细胞损伤或细胞活化情况。
本试剂盒采用生物发光法检测ATP浓度，检测原理为萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase）催化ATP和Luciferin反应释放光子，在Luciferin和Luciferase过量的反应体系中，发光强度与ATP浓度成正比，通过检测发光强度即可检测ATP的浓度。
本试剂盒经过特殊优化，具有良好的检测线性，比一般的试剂盒测定准确度高，另外通过减缓发光信号衰减带来较高的时间稳定性，发光信号可以在反应启动后5-30min内测定。
本试剂盒检测ATP线性范围为0.001-1μM，灵敏度≤0.001μM。
本试剂盒能够检测细胞裂解上清、组织裂解上清、细胞培养上清、血浆、血清及环保样品中的ATP。
试剂盒组成
组份名称 | 规格 | 数量 |
ATP Assay Buffer | 13 ml/瓶 | 1 |
D-luciferin (100×) | 250 μl/管 | 1 |
Luciferase (400×) | 75 μl/管 | 1 |
ATP Standard (100μM) | 250 μl/管 | 1 |
储存条件
-20 ℃储存，有效期12个月。
注意事项
1. 每次测定时利用标准品制作标准曲线。
2. 实验过程中，除检测缓冲液外，其它试剂请置于冰上。
3. 本产品仅限专业人员用于科学研究，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
测定前准备
1. 样品的准备
1.1 细胞裂解上清的准备：将需要测定的细胞(1×106-1×107)收集到2ml的离心管中，4℃、300g离心5分钟，弃去上清，然后加入200μl含0.1%Triton X-100的PBS，冰浴裂解30min，4℃、10000g离心10分钟，收集上清。注：利用不含0.1%Triton X-100的PBS，通过超声裂解亦可。
1.2 组织裂解上清的准备：将需要测定的组织(20-50mg)收集到玻璃匀浆器或自动匀浆管中，然后加入0.5ml含0.1%Triton X-100的PBS，匀浆1min，4℃、10000g离心10分钟，收集上清。注：利用不含0.1%Triton X-100的PBS，通过超声裂解亦可。
1.3 细胞培养上清的准备：将需要测定的细胞接种到培养板中，经过干预因素处理后，直接吸取细胞上清，如果是悬浮细胞，4℃、300g离心5分钟，收集上清。
1.4 血浆样品的准备：取新鲜抗凝血液，4℃、1000g离心10分钟，上清为血浆。
1.5 血清样品的准备：取新鲜血液，室温凝固30min，4℃、1000g离心10分钟，上清为血清。
2. 试剂盒的准备
ATP检测工作液的配制：根据待测样品数参考下表配制适当量的ATP检测工作液，表中试剂按比例混
合后即为ATP检测工作液。
1个样品 | 10个样品 | 50个样品 | |
ATP Assay Buffer | 97.5 μl | 0.975 ml | 4.875 ml |
D-luciferin (100×) | 2 μl | 20 μl | 100 μl |
Luciferase (400×) | 0.5 μl | 5 μl | 25 μl |
3. 标准品的准备
在1.5 ml离心管中，加入990μl纯水或裂解液，再取10μl的100μM浓度ATP标准品加入离心管中配制1μM浓度ATP标准品；然后取另外8根1.5 ml离心管，分别加入500μl纯水或裂解液，再吸取500μl的1μM浓度ATP标准品依次倍倍稀释为0.5、0.25、0.125、0.0625、0.0312、0.0156、0.0078、0.0039μM浓度。
测定方法
1. 参考下表，使用白色96孔板，先加入标准品或样品，然后加入ATP检测工作液，混匀，室温孵育5分钟。
空白对照孔 | 标准曲线孔 | 样品孔 | |
纯水或裂解液 | 100 μl | ─ | ─ |
标准品 | ─ | 100 μl | ─ |
样品 | ─ | ─ | 100 μl |
ATP检测工作液 | 100 μl | 100 μl | 100 μl |
2. 待反应完成后，利用化学发光酶标仪测定相对发光强度（RLU）。