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铁离子比色法检测试剂盒 BES-BK2790B

Total Iron Content Colorimetric Assay Kit

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铁离子比色法检测试剂盒


产品说明:

铁是人体必需的元素之一,对人体的新陈代谢和身体健康具有重要作用,血液中铁的含量不足,就会造成缺铁性贫血。铁存在于人体所有的细胞内,各组织、器官包括各内分泌腺都含有铁。肝脏、脾脏和肺组织内含量较为丰富。成人体内含铁3~5克,大部分都以蛋白质复合物形式存在,极少部分以离子的形态存在。本试剂盒采用亚铁嗪比色法可以定量细胞铁离子,线性范围5~300uM。产品包括标准品和空白对照,本试剂盒可进行100个样品的检测。


原理:

铁与蛋白结合成复合物,在酸性介质中铁从复合物中解离出来,再被还原剂还原成二价铁,并与亚铁嗪生成紫红色化合物,在540-580nm处可比色测定。 其反应如下图所示:



组成:

1. 细胞裂解液: 20 ml

2. 缓冲液: 5ml

3. 检测剂: 3ml

4. 标准品: 1ml

5. 稀释用液: 20ml


储存:

4℃保存,6个月有效。


适用范围:

该试剂盒可用于培养细胞中铁离子定量检测。

用户自备:4.5%高锰酸钾溶液5ml(0.225g高锰酸钾溶解于5ml纯水中)


操作步骤:

1. 样品准备:

首次实验建议使用六孔板培养细胞。将DMEM培养过的细胞用冷的PBS 2ml洗两遍,将PBS吸弃(若不马上检测可将其冻存于-20℃)。200ul/孔(或根据实际情况适量增减)裂解液裂解细胞,置于摇床裂解2h。

2. 标准品的稀释:用试剂盒提供的稀释用液将3mM 的标准品母液稀释为:300 uM、150uM、75uM、37.5uM、18.75uM、9.38uM、4.69uM。注意倍比稀释并设置0浓度对照反应管。

3. 将缓冲液与4.5%高锰酸钾溶液按1:1混匀,称为混液A。

4. 参考下表使用1.5ml离心管,设置空白对照管、标准品管和样品管。如果样品中的铁元素含量过高,用裂解液适当稀释后再进行测定。


空白对照

稀释后的标准品

裂解的样品

稀释用液

100μl


混液A

100μl

100μl

100μl

样品

100μl

标准品工作液

100μl

5. 混匀,60℃ 孵育1h。

6. 冷却至室温,将管盖与管壁上的液滴离心入管底。

7. 加入30ul 铁离子检测剂,混匀,室温孵育,30min。此步可能产生络合物沉淀,用移液器轻轻吹打即可溶解,若沉淀不溶,12000rpm离心5分钟,取上层清液即可。

8. 取200ul 于96孔板,在550nm测定吸光度。如果不能测定550nm,也可以在540nm~580nm范围内检测。

9. 绘制标准曲线并计算铁离子浓度。


说明:

1. 本试剂盒不受锰离子、镁离子、镍离子和锌离子等的干扰。
2. 操作过程中,样品与试剂等避免与铁器接触,以防污染。

3. 所测样本的值高于标准曲线的上限,应稀释样品后重新测定。

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作,检测试剂有腐蚀性,请小心操作,若不慎沾到皮肤上请马上用清水冲洗干净。

5. 该试剂盒仅供科学研究使用。



用途:该产品仅供科研实验使用,未经允许不得用于其它用途!


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