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土壤酸性磷酸酶(S-ACP)测试盒 BES-BK2209B

土壤酸性磷酸酶(S-ACP)测试盒

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土壤酸性磷酸酶(S-ACP)测试盒

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶,其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性,是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 显著影响,根据最适 pH 范围,通常分为酸性、中性和碱性三种类型。

测定原理:

4-羟甲基-7-香豆素(MUB)在 365 nm 波长处激发, 能在 470 nm 处检测到荧光, 它与某些物质结合后荧光特性消失, 通过酶的水解作用MUB释放出来, 通过检测荧光量来表征酶活性。

自备仪器和用品:

多功能酶标仪、恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体 120mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。用前加 11 mL 蒸馏水充分溶解。

试剂三:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。

粗酶液提取:

新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干,过 30~50 目筛。按照土壤质量(g):试剂一 mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 土壤,加入 1mL 试剂一),振荡混匀。

测定步骤:

1. 测定管:在震荡条件下取 100 μL 土壤悬液到 EP 管中,加入 100 μL 试剂二,30℃震荡避光培养 3 h,从中吸取 134 μL 到黑色不透光 96 孔板中,加入 66 μL 试剂三后用多功能酶标仪进行检测,激发光波长 365 nm,测定波长 470nm。

2. 对照管:取 100 μL 蒸馏水到 EP 管中,加入 100 μL 试剂二,30℃震荡避光培养 3 h,从中吸取 134 μL 到黑色不透光 96 孔板中,加入 66 μL 试剂三后用多功能酶标仪进行检测,激发光波长 365 nm,测定波长 470nm。 ΔA=A 测定-A 对照

注意:对照管只需测定一次。

土壤酸性磷酸酶活性计算公式:

标准曲线:y = 62629x - 2266.4 R2 = 0.9996 x:MUB 标准品浓度(nmol/mL)y:荧光强度酶活(nmol/h /g 土样)=(ΔA+2266.4)÷62629×V÷T÷W

=(ΔA+2266.4)÷187887÷WV:提取液体积,1 mL;W:土壤样品质量,g;T:催化反应时间,3 h。


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