土壤外切-β-1，4-葡聚糖酶（纤维二糖水解酶）（S-C1）测试盒

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

C1（EC3.2.1.91）存在于细菌、真菌和动物体内，是纤维素酶系的组份之一，C1催化多聚糖链的末端非还原端释放出纤维二糖和葡萄糖。

测定原理：

采用3,5－二硝基水杨酸法测定C1催化微晶纤维素降解产生的还原糖的含量。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 15mL×1 瓶，4℃保存； 试剂二：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；

样品测定的准备：

称取约 0.1g 新鲜土样或风干土样，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆，室温振荡提取 30min，然后 10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤：

1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。

2、加样表（在 EP 管中依次加入下列试剂）：混匀，37℃准确水浴 2h试剂二 1000 1000混匀， 90℃水浴 10min（盖紧，防止水分散失），冷却后，测 540nm 下吸光值 A，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。

S-C1 活性计算

标准条件下测定回归方程为 y = 6.4078x - 0.0673；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。

单位的定义：每 g 土样每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

S-C1 活力(μg /min /g 鲜重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V 反总]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=14.305×(ΔA+0.0673) ÷W1000：1mg/mL=1000ug/mL；V 反总：反应体系总体积，0.55mL； V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，120 min；W：样本质量，g。