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土壤亮氨酸氨基肽酶(S- LAP) 测试盒 BES-BK2197B

土壤亮氨酸氨基肽酶(S- LAP) 测试盒

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土壤亮氨酸氨基肽酶(S- LAP) 测试盒

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

S-LAP 是一类能水解肽链 N-末端为亮氨酸的酶,由土壤微生物分泌。S-LAP 活性变化与机体某些病理状态密切相关。

测定原理:

S-LAP 分解 L-亮氨酰对硝基苯胺生成对硝基苯胺,后者在 405nm 有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算 S-LAP 活性。

自备用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

试剂一:液体 65mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃保存;

S-LAP 测定步骤:

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 405nm,蒸馏水调零。

2、 在试剂二瓶中加入 30mL 试剂一充分溶解(如较难溶解,可 60℃水浴加热约 30min 促进溶解);在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 10min 以上;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

3、 操作表

2021091306282382451

混匀, 37℃振荡反应 1h 后,8000g 4℃离心 10min,取 1mL 上清液于比色皿中,405nm 处测定吸光值 A,计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。

S-LAP 活力单位的计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

单位的定义:每天每 g 土样每天生成 1 μmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

S-LAP(μmol/d /g 土样)=ΔA×V 反总÷(ε×d)×106÷W÷T=14.8×ΔAV 反总:反应体系总体积,1.2×10-3L;ε:对硝基苯胺摩尔消光系数,9.72×103

L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;T:反应时间,1h=1/24d; W:样本质量,0.2g。


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