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果胶酶测试盒 BES-BK2104B

果胶酶测试盒

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果胶酶测试盒

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

果胶酶(pectinase)是一类分解果胶质酶类的总称,包括原果胶酶,果胶酯酶,多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类,广泛存在于植物果实和微生物中,主要用于食品、酿酒、环保、医药、纺织及日化用品行业。

测定原理

果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸,具有还原性醛基,与 DNS 试剂反应生成红棕色物质,在540nm 有特征吸收峰,测定 540nm 处吸光值变化可计算得果胶酶活性。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅。

试剂组成和配制

提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 20mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体 25mL×1 瓶,4℃避光保存。

酶液提取

1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 10000g,4℃离心 10min,取上清置于冰上待测。

3. 细胞培养液等:直接检测。

测定操作表

2021091204235525462

酶活性计算公式

标准曲线:y = 3.9642x - 0.008;R2= 0.9996;x 为标准品浓度,mg/mL;y 为吸光值。

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义:在 50℃,pH3.5 条件下,每毫克蛋白每小时分解果胶产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

果胶酶活性(mg/h/mg prot)= (ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T= 2.523×(ΔA+0.008)÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义:在 50℃,pH3.5 条件下,每克样本每小时分解果胶产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

果胶酶活性(mg/h /g 鲜重)=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷(V 样×W÷V 样总)÷T= 2.523×(ΔA+0.008)÷W

3. 按细胞数量计算

酶活性定义:在 50℃,pH3.5 条件下,每 104细胞每小时分解果胶产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

果胶酶活性(mg/h /104cell)=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总)÷T= 2.523×(ΔA+0.008)÷细胞数量

4.细胞培养液

酶活性定义:在 50℃,pH3.5 条件下,每毫升培养液每小时分解果胶产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

果胶酶活性(mg/h /mL)=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷V 样÷T=2.523×(ΔA+0.008)V 反总:反应总体积,0.5mL;V 样:反应中样本体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W,样本质量,g;T:反应时间,0.5h

注意事项

1. 试剂一若有沉淀析出,请置于 50℃加热溶解。

2. 测定之前请先做预实验,如果吸光值较高或较低,请用提取液做适当的稀释或者加大样本量,并在计算公式中乘以稀释倍数或者以实际加入的样本体积参与计算。

3. 煮沸样本建议在沸水中煮沸 10 分钟,以将酶彻底灭活。


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