Ca2+钙离子测定试剂盒-绿色单波长定量

产品简介：

钙离子检测试剂盒采用 C81 细胞内钙离子浓度荧光探针检测钙离子浓度水平的变化。

 C81 钙离子探针经过特殊设计，疏水性很强，消除了电荷，容易通过细胞膜，具有极高的细胞渗透性，经过简单孵育即可实现细胞加载。穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成不易透过细胞膜的 C81 新产物，从而被滞留在细胞内。细胞内的 C81 钙离子探针能以 1：1 的比例特异性地与 Ca2+结合，并且结合 Ca2+后荧光特性有改变，这种变化可指示 Ca2+的存在及其浓度。

 C81 游离配体几乎是非荧光性的，其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。但是，当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光，荧光会增加 60 至 100 倍，避免了自发荧光的干扰，因而可以直接在单波长激发光下检测其荧光强度即可反映[Ca2+]i 的变化。最大激发波长为 494 nm，最大发射波长为 516 nm。实际检测时推荐使用的激发波长为 488 nm 左右，发射波长为 515～530 nm。可以使用流式细胞仪、荧光酶标仪、光度计、激光共聚焦显微镜或荧光显微镜检测细胞内钙离子浓度的变化。

 C81 荧光探针采用可见光激发，与传统的 Fura-2 等紫外光激发的荧光探针相比，可避免紫外光对细胞的损伤，仪器的适用范围更广泛，具有更强的探针吸收性能，使得更低浓度的探针即可成功检测 Ca2+变化，从而降低了对活细胞的光毒性，检测敏感度更高。C81 与 Ca2+ 亲和力低，易解离，适合测定细胞内 Ca2+ 的快速、微量变化。 

 钙离子浓度变化是活细胞接受外界刺激后产生级联反应的重要信息传递方式，因此细胞内钙离子检测是信号转导 G 蛋白偶联受体（GPCR）介导的相关药物筛选以及其他相关实验中非常重要的一种研究手段。

 可以提供各种细胞分析试剂盒。包括细胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、细胞内 pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种细胞检测试剂盒产品。

 可以为您提供各种细胞成像、细胞示踪与追踪试剂盒产品。包括各种颜色的 M 系列、N 系列、L 系列、E 系列、G 系列等细胞膜、细胞质、细胞

核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。

 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。

 可以提供各种细胞、组织染色，免疫组织化学，细胞培养等相关试剂盒产品。

产品应用：

流式细胞仪/荧光显微镜/激光共聚焦

使用方法：

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

2.钙离子染色液为 DMSO 溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

3.探针为了便于观察防止误操作导致损失，在试剂盒中时是采用透明管包装，收到后可以离心移入干燥黑色避光密封管或者用铝箔包裹避光。

4.荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

5.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

6.染色后立即进行分析。

7.C81 探针容易受潮，稳定性较差，注意干燥保存。从冰箱取出后，请确认在干燥的环境放至室温后再开封。

8.C81 探针母液时要用干燥的新吸头，不能使用含水的吸头。

9.未使用完的 C81 探针母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。母液遇水极易分解，如果长期不用，建议根据每次使用量分装保存，用封口膜封口，并用铝箔纸包裹，放在一个密闭性能好的塑料袋中，并放入一包干燥剂，在≤-20℃密封避光保存。

10.C81 探针工作液含水，配制后不可以长期保存，须现配现用。

11.C81 融解后离心至管底部再打开螺旋盖，防止开盖时损失。

12.可以在染色工作溶液中加入 20% Pluronic F127 溶液（可选步骤），Pluronic F127 可以帮助 C81 更快进入细胞，不建议在 Pluronic F127 中长期保存 C81 溶液。

13.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先确定最佳条件。在正式实验前先摸索一下细胞量、钙离子荧光探针的终浓度、培养时间等，找到最佳实验条件。以下方法仅供参考。

1. 染色工作液的配制：

用 HBSS 稀释 C81 溶液 200 倍-500 倍，配制成 C81 染色工作液。

2. 收集培养好的待测细胞样本，用 HBSS 洗涤细胞 3 次。

3. 离心去上清后，将 C81 染色工作液加入细胞，在 37℃孵育 30 -60 分钟。

4. 用 HBSS 洗涤细胞 2-3 次。

5. 用 200μl 或 500 μl HBSS 重悬细胞。在 37℃下再继续孵育 20-40 分钟。

6. 然后用该细胞进行荧光钙离子检测。激发波长 488-495 nm，发射波长 516 nm。得到荧光值 F。

7. 在细胞重悬液中加入 10%体积的（20 μl 或 50 μl）通透剂，充分混匀，在 37℃避光孵育 10 分钟。测定荧光值 F1。

8. 在以上细胞重悬液中加入 10%体积的（20 μl 或 50 μl）淬灭剂，充分混匀，在 37℃避光孵育 10 分钟。测定荧光值 F0。

9. 根据以下公式计算钙离子浓度：

钙离子浓度 = 346 nM *（F-F0）/ （F1-F）

常见问题分析：

1.流式检测时细胞出现分群？

荧光钙离子检测灵敏度极高，用流式细胞仪检测时可能会碰到细胞分群的现象，出现两个峰，是样本中出现钙离子浓度有差异的细胞群体。

此时分析时需要圈选所有细胞群，分析所有细胞的平均荧光强度。

有条件可以使用酶标仪或分光光度计检测。

注意事项：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。